羊肚菌菌种如何采集

菌种生产流程如下 ：羊肚菌选择和采集→组织（孢子）分离→提纯培养→出菇试验→优良一级菌种→复壮培养、菌种扩繁→二级菌种→接种、培养栽培菌种。

1．菌种分离
羊肚菌的分离方法与其他食用菌大体相同，采用组织分离和孢子分离。

（1）组织分离　

选取成熟、具优良长势的羊肚菌子实体，在无菌环境中用接种针将组织块接入平皿培养基上，获得菌种。

① 培养基制作。配方为马铃薯 200g、葡萄糖 20g、琼脂 18 ～ 20g、磷酸二氢钾 3g、硫酸镁 1.5g、水 1000ml。将培养基装到 500ml 三角瓶中（每瓶装入 200ml），115℃灭菌 30min 后在无菌条件下将培养基倒入平皿中（每个平皿约 20ml），冷却备用。

② 选取头潮、新鲜、健壮、周围幼菇或原基多、朵形圆整、七八分熟的子实体。

③ 菇面用 75% 酒精棉球擦拭消毒。

④ 切取组织块（菌肉）。用手术刀切开种菇，在菌盖或菌柄内侧用无菌手术刀或尖嘴镊子取 5mm 见方组织块（菌肉）接于培养基上（如下图所示）。

取组织块

防治培养基上

⑤ 培养。温箱 18℃恒温培养，2 天后组织 块 萌 发， 待 菌 落 长 到 2cm，用接种针选取最优菌落的先端菌丝接入新培养基，进行尖端脱毒。将菌丝生长快、产菌核适中、产色素少且晚的分离物挑选出来，作为第一代母种保存备用。

组织块萌发

菌种长到2cm

（2）孢子分离　

在无菌条件下，使孢子在适宜的培养基上萌发成菌丝体而获得纯培养的方法。多孢分离的菌株不能直接用于生产，要经过出菇试验。

采集孢子有多种方法，如整朵插种菇、三角瓶钩悬和试管琼脂培养基黏附法等，此处介绍整朵插种菇法。
① 选取头潮、新鲜、健壮、八九分成熟的子实体。

② 采集孢子。将按照组织分离方法消毒子实体的整朵菇插入无菌孢子收集器里，在 18℃下培养 2 ～ 3 天后子囊孢子落下，形成孢子印 。

采集孢子

③ 孢子分离、培养。无菌条件下，将少量孢子移入盛无菌水的三角瓶内稀释成孢子悬浮液，其浓度以 1 滴水中含 5 ～ 10 个孢子为宜。用接种环取孢子悬浮液在斜面上划线，孢子萌发后菌丝体长在一起。取菌丝块转接新的平皿培养基上，18℃避光培养。选取菌丝生长快，菌核数量适中，产生色素少且晚的培养物用于栽培试验。